弓形虫TR与ROP18双基因缺失及对NF-κB-IL-12-ROS信号通路相关因子的影响

作者：耿小玲; 陈芸; 刘旗; 张曼玉; 蒋蔚; 段倩玉; 王权^*

来源：中国动物传染病学报, 2023, 31(02): 1-12.

DOI：10.19958/j.cnki.cn31-2031/s.2023.02.014

• 刚地弓形虫
• CRISPR/Cas9
• TR
• ROP18
• 免疫逃避

为探究弓形虫的TR与ROP18基因对NF-κB-IL-12-ROS信号通路的影响和抗宿主ROS损伤中是否具有协同作用，本研究利用CRISPR/Cas9技术构建了TR与ROP18双基因敲除株（TR-ROP18-KO）。通过检测TR/ROP18单、双基因缺失株氧化应激水平以及对小鼠巨噬细胞活性氧（ROS）水平影响的研究发现，TR-ROP18-KO株引发的氧化应激水平极显著高于RH株（P<0.01），但与TR单基因缺失株无显著差异（P>0.05）；利用RT-PCR检测TR/ROP18单、双基因缺失株感染小鼠巨噬细胞产生的NF-κB、IL-12 mRNA水平和ELISA检测小鼠血清中IL-12的水平发现，TR-ROP18-KO株感染组虽然极显著高于RH株感染组（P<0.01），但TR-ROP18-KO株感染组却未显著高于TR-KO株感染组（P>0.05），表明弓形虫TR与ROP18基因在抗宿主ROS损伤中不存在协同作用。本研究利用TR与ROP18双基因缺失株能够明确解析这两个基因在抗宿主ROS损伤中有无协同作用，为深入研究这两个基因在I型弓形虫免疫逃避途径中的协同作用奠定基础，这也为后续弓形虫双基因功能协同作用的研究提供了一个新思路。

• 单位
  基础医学院; 复旦大学; 中国农业科学院上海兽医研究所