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摘要
目的:采用冷冻电子显微镜(cryo TEM)体外观察人釉原蛋白的自组装过程,分析自组装各阶段蛋白的聚集状态及细微结构。方法:提取青少年下颌第三磨牙牙胚细胞总RNA,用RT-PCR获得人釉原蛋白基因全长,再与pMD19-T载体构建重组质粒,转入宿主菌E.coli Top10中诱导表达并纯化。冷冻电子显微镜观察pH值从3.5跃升至8.0时釉原蛋白发生自组装的聚合状态。结果:当pH值为8.0时在1～20 min内观察到釉原蛋白由低聚体逐步组装成多聚体、纳米球及纳米链等结构。结论:在适宜条件下,人釉原蛋白能分级组装成纳米球。
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