Pim-3质粒构建体在大鼠活体肝组织的表达和活性的研究

作者：刘亮明; 邓欢; 张吉翔; 罗杰; 尹东; 郭宏兴

来源：中华医学杂志, 2007, 87(36): 2567-2570.

• 脱噬作用
• 质粒
• Pim-3基因
• 载体构建

目的构建大鼠 Pim-3绿色荧光蛋白(GFP)表达质粒并观察其在活体肝组织的表达和活性。方法采用逆转录 PCR 的方法获取目的 cDNA,重组质粒经酶切鉴定和测序;大鼠活体基因肝靶向性转染通过尾静脉流体力学注射法完成,肝细胞凋亡的诱导采用腹腔内注射内毒素和 D-半乳糖胺(D-GalN)来实现。动物分为 A、B、C 和 D 组(即正常、对照、空质粒和重组质粒组,每组8只);肝组织 GFP 表达通过荧光显微镜、Pim-3表达通过逆转录(RT)-PCR 方法检测;肝细胞凋亡采用缺口末端标记技术(TUNEL)分析和半胱天冬酶-3活性检测。结果成功构建 GFP 表达质粒 pEGFP-N2/Pim-3;重组质粒和空质粒 DNA 通过流体力学注射法被成功转染入大鼠活体肝组织内;4组 Pim-3的相对表达水平分别为0.06±0.02、0、0、0.49±0.15。D 组与其他3组差异均有统计学意义(均 P<0.01);4组肝细胞的凋亡指数(AI)分别为:(3.1±0.7)%,(72.5±6.1)%、(69.8±5.7)%和(4.9±1.2)%;肝组织半胱天冬酶-3活性分别为(60±15)、(147±55)、(142±50)和(76±27)pmol·min-1·mg-1,D 组与 B、C 两组间差异有统计学意义(均 P<0.01)。结论构建的重组体质粒 pEGFP-N2/Pim-3能在大鼠活体肝组织内有效表达,并发挥其对肝细胞凋亡的抑制效应。

• 单位
  南昌大学第二附属医院; 江西省分子医学重点实验室