人外周血CD4+CD25+Foxp3+调节性T细胞分选及扩增方法的建立

作者：祝丽琼; 陈慧; 袁昱; 刘梅兰; 魏菁; 苏芳; 张建平

来源：热带医学杂志, 2017, 17(08): 996-1133.

DOI：10.3969/j.issn.1672-3619.2017.08.002

• 调节性T细胞
• Foxp3
• 免疫磁珠分选
• 体外扩增

目的建立人外周血CD4+CD25+Foxp3+调节性T细胞(Treg)的免疫磁珠分选法(MACS)及体外扩增方法 ,并对扩增前后Treg细胞纯度及表型进行鉴定。方法流式细胞术检测人外周血Treg细胞占CD4+T细胞的比例;免疫磁珠法分选CD4+CD25+Treg细胞,用CD3/CD28单抗包被的Dynalbeads联合IL2共同刺激CD4+CD25+Treg细胞进行体外扩增培养,在扩增培养的第0、7、14、21天分别进行细胞计数及检测细胞的活性,取扩增培养第0天及第14天细胞行流式细胞术检测扩增前后细胞纯度、主要表面标记及Foxp3的表达情况。结果正常人外周血CD4+CD25+Foxp3+Treg水平占CD4+T细胞(7.94±1.86)%,MACS能够成功分选出CD4+CD25+Foxp3+Treg细胞,分选平均纯度达(95.86±0.65)%,细胞活性>95%;以CD3/CD28单抗包被的Dynalbeads联合IL2共同刺激CD4+CD25+Treg细胞进行外扩增培养后,细胞有明显扩增。经2周扩增后,细胞扩增倍数达到原细胞数量的(21.33±1.53)倍,扩增后细胞Foxp3的表达由(95.86±0.65)%下降至(93.71±1.30)%,但差异无统计学意义(P>0.05)。结论免疫磁珠分选法能够分选出高纯度的CD4+CD25+Foxp3+调节性T细胞,体外成功扩增CD4+CD25+Foxp3+调节性T细胞,扩增前后Treg细胞的纯度及表型无明显变化。

• 单位
  中山大学孙逸仙纪念医院