利用慢病毒载体系统构建稳定敲降Atg7基因的PK-15细胞系

作者：赵俊芳; 雷乾; 孙鹏; 卢曾军; 李志勇^*

来源：中国兽医科学, 2022, 52(07): 915-920.

DOI：10.16656/j.issn.1673-4696.2022.0110

• 自噬
• Atg7基因
• shRNA
• 慢病毒载体

构建可以稳定敲降Atg7基因的重组慢病毒载体，并使用该载体构建稳定敲降Atg7基因的PK-15细胞系。首先根据GeneBank数据库中Atg7基因的序列设计特异性的干扰序列并构建重组慢病毒载体，包装慢病毒后感染PK-15细胞，通过药物筛选的方式获得稳定敲降Atg7基因的细胞系，最后通过实时荧光定量PCR和Western-blot试验检验细胞系的敲降效果。重组质粒的双酶切结果和测序结果证实，重组载体序列与最初设计序列完全一致；实时荧光定量PCR和Western-blot试验的结果均显示重组质粒pLKO.1-Atg7-shRNA-Puro能够抑制PK-15细胞中Atg7的表达和自噬的发生。上述结果表明，本研究成功构建了重组慢病毒载体p LKO.1-Atg7-shRNA-Puro和稳定敲降Atg7基因的PK-15细胞系，为后续研究Atg7基因的生物学功能以及细胞自噬在宿主抗病毒感染中的重要作用奠定了基础。

• 单位
  中国农业科学院兰州兽医研究所; 温州医科大学; 河北工程大学; 家畜疫病病原生物学国家重点实验室