鼠伤寒沙门菌ydiU基因敲除株的构建及其在压力培养条件下的生长特性研究

作者：宋楠楠; 杜忠君; 岳盈盈; 于功昌; 贾强; 李冰清^*; 邵华^*

来源：中国病原生物学杂志, 2019, 14(12): 1415-1428.

DOI：10.13350/j.cjpb.191210

• 鼠伤寒沙门菌
• ydiU基因
• 敲除株
• 压力应激
• 生长曲线

目的构建鼠伤寒沙门菌ydiU基因敲除株,并比较敲除株与野生株在不同生存压力条件培养基中的生长曲线,为进一步研究ydiU基因及其编码蛋白YdiU的功能奠定基础。方法以鼠伤寒沙门菌ATCC14028株作为母本PCR扩增含有ydiU基因上下游同源臂和氯霉素抗性片段的线性打靶基因,通过同源重组操作得到ydiU基因敲除株ATCC14028ΔydiU。分别测定敲除株与与野生株在营养限制、氧化应激、缺铁、高盐,高糖、低PH和吲哚等压力培养基中的生长曲线,并对两株细菌的生长特性进行比较。结果经PCR内、外侧鉴定及测序鉴定表明ydiU基因敲除株构建成功。敲除株和野生株在LB培养基中培养6h即对数生长期后期时平均A600值分别为0.805和0.894,而在培养时间9h即平台期前期时检测平均值分别为1.022和1.220。两个生长关键期的细菌生长速度均表现为敲除株略为缓慢,但两株菌最终在平台期后期达到相同A值。在限制营养培养基(M9)中,敲除株增殖速度落后于野生株细菌,敲除株培养时间6h、9h和22h的平均A600值分别为0.511、0.590和0.693,相同培养时间野生株平均值为0.595、0.719和0.845。以上数据表明在营养匮乏的生存压力下,ydiU基因对于细菌的生存和增殖具有关键作用。敲除株与野生株在培养基中活性氧增高、高糖、低PH、高吲哚浓度等压力下生长速度和状态也有不同,提示ydiU基因在细菌的各种压力应激中可能发挥重要作用。结论成功构建了ydiU基因敲除株ATCC14028ΔydiU,其在多种压力培养基中显示出与野生株不同的生长特性,为进一步探究YdiU蛋白的功能提供了良好的基础和思路。

• 单位
  山东省职业卫生与职业病防治研究院; 山东中医药大学; 山东省医学科学院基础医学研究所