PCR扩增的shRNA表达盒快速筛选PRRSV有效siRNA序列

作者：贺云霞; 华荣虹; 周艳君; 安同庆; 仇华吉; 王云峰; 童光志

来源：中国预防兽医学报, 2007, (05): 376-380.

• RNA干扰
• siRNA
• 短发夹RNA(shRNA)
• 猪繁殖与呼吸综合征病毒 RNA interference
• short interference RNA(siRNA)
• short hairpin RNA(shRNA)
• porcine reproductive and respiratory syndrome virus(PRRSV)

有效siRNA的筛选是RNAi研究的关键点之一。本研究选取猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)的核衣壳蛋白(N)作为靶基因,使用http://www.ambion.com的靶位点筛选和设计工具,选取4个siRNA序列(siRNA95、siRNA179、siRNA218和siRNA294),利用一步PCR法产生包含U6启动子的短发夹RNA表达盒技术快速筛选高效siRNA,PCR法制备的shRNA表达盒(PCR-shRNA95、PCR-shRNA179、PCR-shRNA218和PCR-shRNA294)分别与表达N-EGFP融合蛋白的重组质粒pEN-ORF7共转染至293T细胞,48 h后荧光显...

• 单位
  兽医生物技术国家重点实验室; 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所