摘要
为建立一种检测A型塞内卡病毒(SVA)抗体的阻断ELISA方法,本研究制备了VP2蛋白的单克隆抗体,使用重组VP2蛋白作为包被抗原,利用酶标单克隆抗体2D4E作为标记抗体,对阻断ELISA的各个条件进行优化。结果显示,所制备的2株单克隆抗体均为IgG1类,且具有良好的免疫反应性。建立的阻断ELISA方法抗原的最适包被质量浓度为4 mg/L;最佳封闭液为1%BSA;待检血清最佳稀释倍数为1∶4;酶标单抗2D4E最佳稀释倍数为1∶3 200;避光显色时间为10 min。该ELISA方法与猪流行性腹泻病毒(PEDV)阳性血清、猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)阳性血清、猪伪狂犬病病毒(PRV)阳性血清不发生交叉反应,且灵敏性较好。重复性试验结果显示,该阻断ELISA方法的批内和批间变异系数均小于6%。利用该方法与间接免疫荧光(IFA)共同检测91份临床猪血清样本,总符合率为97.8%(89/91)。对河北部分地区372份猪血清样品进行检测,结果显示SVA抗体阳性率为7.8%(29/372),且在春夏两季阳性检出率比较高。研究结果表明,该阻断ELISA方法具有较高的特异性、敏感性和重复性,可应用于临床上猪血清样品的检测,为SVA的监测和防控提供了技术支持。
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