A型塞内卡病毒VP2蛋白单抗制备及阻断ELISA方法的建立

作者：田占云; 崔川; 李明珠; 白若曼; 安满鑫; 袁万哲; 李丽敏^*

来源：中国兽医学报, 2023, 43(05): 872-879.

DOI：10.16303/j.cnki.1005-4545.2023.05.04

• A型塞内卡病毒
• VP2蛋白
• 阻断ELISA
• 单克隆抗体

为建立一种检测A型塞内卡病毒(SVA)抗体的阻断ELISA方法，本研究制备了VP2蛋白的单克隆抗体，使用重组VP2蛋白作为包被抗原，利用酶标单克隆抗体2D4E作为标记抗体，对阻断ELISA的各个条件进行优化。结果显示，所制备的2株单克隆抗体均为IgG1类，且具有良好的免疫反应性。建立的阻断ELISA方法抗原的最适包被质量浓度为4 mg/L;最佳封闭液为1%BSA;待检血清最佳稀释倍数为1∶4;酶标单抗2D4E最佳稀释倍数为1∶3 200;避光显色时间为10 min。该ELISA方法与猪流行性腹泻病毒(PEDV)阳性血清、猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)阳性血清、猪伪狂犬病病毒(PRV)阳性血清不发生交叉反应，且灵敏性较好。重复性试验结果显示，该阻断ELISA方法的批内和批间变异系数均小于6%。利用该方法与间接免疫荧光(IFA)共同检测91份临床猪血清样本，总符合率为97.8%(89/91)。对河北部分地区372份猪血清样品进行检测，结果显示SVA抗体阳性率为7.8%(29/372),且在春夏两季阳性检出率比较高。研究结果表明，该阻断ELISA方法具有较高的特异性、敏感性和重复性，可应用于临床上猪血清样品的检测，为SVA的监测和防控提供了技术支持。

• 单位
  河北农业大学