酵母双杂交诱饵表达载体pGBKT7-cide-3的构建、鉴定以及毒性、自激活效应的检测

作者：闵婕; 李青; 马楠; 康艳霞; 李娜

来源：现代肿瘤医学, 2013, (03): 459-462.

• 基因
• 克隆
• cide-3
• 酵母双杂交 gene
• clone
• cide-3
• yeast two hybrid

目的:构建并转化酵母双杂交体系中"诱饵"载体pGBKT7-cide-3以便用于人肝cDNA文库的筛选。方法:用RT-PCR方法从人肝细胞株QZG中扩增cide-3基因全外显子片段,并定向克隆入细菌-酵母穿梭表达质粒pGBKT7中;用PEG/LiAC法将pGBKT7-cide-3转化感受态酵母菌AH109。提取转化酵母菌的质粒DNA和总蛋白进行鉴定。同时检测表达产物对报告基因的激活作用及对酵母株AH109的毒性。结果:成功扩增出人cide-3 cDNA片段,限制性内切酶酶切和DNA测序证实获得正确的重组质粒pGBKT7-cide-3;获得可在色氨酸缺陷培养基(SD/-Trp)上生长含pGBKT7...

• 单位
  第四军医大学; 西京医院