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摘要
目的构建Hsp90α基因的单质粒四环素/强力霉素诱导表达系统,并验证其不同表达量对Hep G2肝癌细胞增殖的影响。方法通过PCR,分别从p Retro X-Tet-On Advanced质粒和pc DNA3.1-EGFP质粒中扩增rt TA表达盒和EGFP基因,依次将rt TA和EGFP基因克隆入p TRE-Tight载体中,p Retro X-Tight载体中,获得EGFP标记的Tet-on单质粒系统。基于本系统,构建DOX诱导的Hsp90α表达质粒p Retro X-Hsp90α-EGFPTet-On,然后采用脂质体转染Hep G2细胞,以不同浓度(0,100,500,2500 ng/m L)的DOX诱导,通过荧光显微镜、荧光定量PCR以及Western blot检测EGFP和目的蛋白Hsp90α的表达。结果转染质粒载体后的Hep G2细胞经不同浓度的DOX 24 h后,RT-PCR和Western blot结果显示一致,随着DOX浓度的增大,Hsp90α基因表达量逐渐增加,DOX 500 ng/m L时时,基因表达的水平达到高峰;加入DOX 48 h后,细胞的增殖明显高于对照组,且存在剂量依赖性。结论该研究成功地应用四环素基因表达调控系统调控了Hsp90α基因在HepG2细胞内表达及促肿瘤细胞增殖的功能,为进一步探讨Hsp90α基因与肿瘤的增殖和侵袭之间的关系提供理论基础。
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