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摘要
目的探讨p53途径在大黄素抑制血管平滑肌细胞增殖作用中的地位。方法通过细胞计数、老化相关β-半乳糖苷酶染色、AnnexinV标记等方法观察大黄素抑制血管平滑肌细胞增殖的特点。3H-胸苷掺入法测定DNA合成、流式细胞仪了解细胞周期变化、Westernblot检测p53蛋白表达变化、基因芯片观察mRNA表达水平。结果(1)1·6~3·1μg/ml大黄素延缓细胞生长,6·3~12·5μg/ml大黄素促进细胞老化,25·0μg/ml大黄素则可显著诱导细胞凋亡。(2)大黄素干预24h后,出现非计划性DNA合成现象,这是DNA损伤的敏感性标志。p53基因和蛋白表达水平呈大黄素浓度依赖性上调。除了细胞增殖基因表达下调,其他基因表达均上调,如细胞老化基因、细胞凋亡基因、DNA损伤修复基因。(3)大黄素能够迅速渗透进入细胞,在细胞内的分布具有明显的选择性,绝大多数以颗粒形态分布于细胞胞浆中,细胞核中也有少量分布。结论大黄素通过损伤DNA激活p53途径。随着大黄素浓度升高,p53途径激活程度也随之增强并产生多种细胞增殖抑制效应,即生长停滞、细胞老化和细胞凋亡。
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单位复旦大学附属中山医院
