小麦种子过氧化物酶基因wp1的克隆及在大肠杆菌中的表达

作者：单丽伟; 罗海霞; 范三红; 郭蔼光

来源：西北农林科技大学学报(自然科学版), 2009, 37(03): 213-218.

DOI：10.13207/j.cnki.jnwafu.2009.03.015

• 小麦
• 种子过氧化物酶
• 高GC含量
• 基因克隆
• 基因表达 wheat
• seed peroxidase
• high GC content
• gene cloning
• gene expression

【目的】克隆小麦种子过氧化物酶基因wp1,并利用原核系统表达纯化。【方法】通过RT-PCR从小麦未成熟种子中扩增wp1基因cDNA,构建His-tag和MBP融合表达载体,并在大肠杆菌中进行表达。使用直链淀粉亲和层析获得MBP-WP1融合蛋白,并以ABTS为底物检测酶活性。【结果】获得的wp1基因cDNA编码一种358个氨基酸残基的蛋白产物,其序列与大麦BP1相似性高达89%;空间结构预测结果表明,小麦WP1属于第三类过氧化物酶,具有该家族成员典型的血红素和钙离子结合位点;His-Tag融合的WP1主要以包涵体形式存在,而MBP融合的WP1主要以可溶形式存在,表达量分别达到总蛋白的18.2%和...

• 单位
  生命科学学院; 西北农林科技大学