乙型肝炎病毒X蛋白通过调控活性氧/NLRP3信号通路介导乙肝相关性肾小球肾炎足细胞焦亡

作者：余亚妮; 李保爽; 陈月琪; 孙静宜; 杨小倩; 冯墨宣; 蒋伟^*

来源：中华肾脏病杂志, 2022, 38(10): 905-915.

• 乙型肝炎病毒
• 活性氧
• NLR家族, 热蛋白结构域包含蛋白3
• 细胞焦亡
• 肾小球肾炎
• 乙型肝炎病毒X蛋白

目的探讨乙型肝炎病毒X蛋白(hepatitis B virus X protein, HBx)是否通过调控活性氧(reactive oxygen species, ROS)/核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白3(nucleotide-binding oligomerization domain-like receptor protein 3, NLRP3)信号通路引起足细胞焦亡。方法采用小鼠肾足细胞过表达HBx基因来模拟乙型肝炎相关性肾炎的发病机制。将足细胞分为以下5组:空白对照组(不予特殊处理)、阴性对照组(转染对照慢病毒)、HBx过表达组(转染HBx过表达慢病毒)、HBx过表达+NLRP3 siRNA组(共转染HBx过表达慢病毒和NLRP3 siRNA)、HBx过表达+ROS抑制剂组(转染HBx过表达慢病毒和添加ROS抑制剂)。电镜下观察足细胞的形态学改变;二氯二氢荧光素二乙酸酯(dichlorodihydrofluorescein diacetate assay, DCFH-DA)法检测ROS的生成;Hoechst 33342染色观察足细胞细胞核的形态和数量变化;酶联免疫吸附测定试验分别检测胱天蛋白酶1(Caspase-1)酶活性、乳酸脱氢酶、白细胞介素(IL)-1β和IL-18水平;实时荧光定量PCR和Western印迹法分别检测细胞焦亡相关蛋白如NLRP3、凋亡相关斑点样蛋白(ASC)、Caspase-1、IL-1β和IL-18 mRNA和蛋白水平的表达;TUNEL染色和流式细胞术检测焦亡细胞数量;免疫荧光染色检测Desmin和Nephrin的表达。结果 HBx过表达慢病毒成功感染足细胞后, 电镜下观察到细胞发生焦亡相关形态学改变;与阴性对照组相比, HBx过表达组ROS水平显著升高(P<0.05);Hoechst 33342染色发现HBx过表达后细胞核浓缩;TUNEL染色和流式细胞术证明HBx过表达后足细胞发生了焦亡;焦亡相关蛋白NLRP3、ASC、Caspase-1、IL-1β和IL-18 mRNA和蛋白表达显著上调(均P<0.05);Caspase-1酶活性、乳酸脱氢酶和Desmin表达水平升高(均P<0.05)。而NLRP3敲低或ROS抑制减弱了HBx过表达引起的足细胞焦亡以及相关蛋白表达增加(均P<0.05)。结论 ROS/NLRP3通路在HBx过表达引起的足细胞焦亡中起着重要作用。

• 单位
  青岛大学附属医院