鼠伤寒沙门菌六型分泌系统效应蛋白Clpv对巨噬细胞极化的影响

作者：杜付熙; 王文婕; 尚珂; 余祖华; 李静; 贾艳艳; 廖成水; 丁轲; 张春杰; 程相朝^*; 陈松彪^*

来源：微生物学报, 2023, 63(07): 2620-2632.

DOI：10.13343/j.cnki.wsxb.20220751

• 鼠伤寒沙门菌
• Ⅵ型分泌系统
• Clpv蛋白
• 表达定位
• 极化

【目的】探讨Ⅵ型分泌系统(type Ⅵ secretion system, T6SS)效应蛋白Clpv在鼠伤寒沙门菌(Salmonella enterica serovar Typhimurium)致病过程中的功能。【方法】以鼠伤寒沙门菌SL1344基因组为模板克隆clpv基因，并比较与其他革兰氏阴性菌台湾假单胞菌(Pseudomonas taiwanensis)、植生拉乌尔菌(Raoultella planticola)、鳗利斯顿氏菌(Listonella anguillarum)、菠萝多源菌(Pantoea ananatis)、粘放线菌(Actinomyces viscosus)和大肠埃希菌(Escherichia coli)的同源性；将clpv基因克隆至pEGFP-N1载体构建重组质粒pEGFP-Clpv，利用Western blotting、实时荧光定量聚合酶链式反应(real-time quantitative polymerase chain reaction, q-PCR)、荧光显微镜以及流式细胞术检测蛋白表达、定位及诱导小鼠巨噬细胞M1型和M2型极化水平。【结果】clpv基因全长为2 637 bp，与台湾假单胞菌的同源性最高；Western blotting、qPCR和免疫荧光检测表明重组蛋白大小约120 kDa，在细胞中有明显绿色荧光并且主要定位于细胞膜；q-PCR和流式细胞术结果发现Clpv转染组巨噬细胞M1型极化显著增加(P<0.01),M2型巨噬细胞极化显著减少(P<0.01)。【结论】成功克隆表达鼠伤寒沙门菌T6SS效应蛋白Clpv，并明确其胞内表达定位以及对巨噬细胞极化的影响。

• 单位
  动物科技学院; 河南科技大学