荷斯坦奶牛瘤胃微生物脲酶的分离与鉴定

作者：赵圣国; 王加启; 刘开朗; 李旦; 于萍; 卜登攀

来源：畜牧兽医学报, 2010, (06): 692-696.

• 瘤胃脲酶
• 分离纯化
• 活性电泳
• LC-MS/MS
• 蛋白质组 ruminant urease
• isolation and purification
• native-PAGE
• LC-MS/MS
• proteomic

本研究旨在从荷斯坦奶牛瘤胃中分离活性脲酶。从奶牛瘤胃中收集瘤胃内容物,通过离心和超声破碎的方法得到不含菌体细胞的瘤胃液(CFRF)和瘤胃菌体蛋白液(RCP),利用85%硫酸铵盐析,并透析后,用HiTrap Capto Q离子交换层析柱纯化脲酶。将纯化后的脲酶用活性PAGE分离,并利用改良的Fishbein染色法,确定脲酶条带位置,切胶,经胰蛋白酶消化后,用LC-MS/MS分析,并用SEQUEST软件在NCBI数据库搜索与质谱信号相匹配的肽段和蛋白质。结果表明从CFRF和RCP中分离出较高活性的脲酶,但经染色后只有RCP脲酶显示活性条带。经质谱分析,最终鉴定出了3种微生物来源脲酶,分别与嗜热链球...

• 单位
  中国农业科学院北京畜牧兽医研究所; 甘肃农业大学; 动物营养学国家重点实验室