沉默NF-κB基因对缺氧胃癌细胞增殖的影响及其机制

作者：刘丹; 张俊文

来源：肿瘤, 2014, 34(01): 33-38.

• 胃肿瘤
• 细胞增殖
• NF-κB
• 缺氧诱导因子1,α亚基
• 磷脂酶D

目的:探讨通过RNA干扰技术沉默核因子-κB(nuclear factor-κB,NF-κB)基因对缺氧胃癌SGC-7901细胞增殖的影响及其可能的机制。方法:将沉默NF-κB基因的重组载体pcDNATM6.2-GW/EmGFPmiR-NF-κB转染SGC-7901细胞,并筛选稳定转染的细胞株。实验分为对照组(SGC-7901细胞在常氧状态下培养)、缺氧组(SGC-7901细胞在缺氧状态下培养)、干扰组(稳定转染pcDNATM6.2-GW/EmGFPmiR-NF-κB后的SGC-7901细胞在常氧状态下培养)和联合组(稳定转染pcDNATM6.2-GW/EmGFPmiR-NF-κB后的SGC-7901细胞在缺氧状态下培养)。应用锥虫蓝染色法检测各组SGC-7901细胞的存活率,平板克隆形成实验和细胞倍增时间法检测各组SGC-7901细胞的增殖变化,蛋白质印迹法检测各组SGC-7901细胞中NF-κB、缺氧诱导因子-1α(hypoxia inducible factor-1α,HIF-1α)和磷脂酶D-1(phospholipase D-1,PLD-1)蛋白的表达水平。结果:重组载体pcDNATM6.2-GW/EmGFPmiR-NF-κB成功转染至SGC-7901细胞,并筛选获得稳定转染的细胞株。与对照组比较,缺氧组SGC-7901细胞的存活率变化不明显,干扰组和联合组SGC-7901细胞的存活率降低(P<0.05);缺氧组SGC-7901细胞的克隆形成数增加,细胞倍增时间缩短(P<0.05);干扰组和联合组SGC-7901细胞的克隆形成数减少,细胞倍增时间延长(P<0.05);干扰组SGC-7901细胞中NF-κB、HIF-1α和PLD-1蛋白的表达水平明显下调,缺氧组SGC-7901细胞中NF-κB、HIF-1α和PLD-1蛋白的表达水平明显上调(P<0.05)。与缺氧组比较,联合组SGC-7901细胞中NF-κB、HIF-1α和PLD-1蛋白的表达水平明显下调(P<0.05)。结论:缺氧条件下,SGC-7901细胞中HIF-1α与NF-κB可能存在相互关系,沉默NF-κB基因可降低HIF-1α和PLD-1的表达,从而抑制缺氧条件下胃癌SGC-7901细胞的增殖能力。

• 单位
  重庆医科大学附属第一医院