传染性脾肾坏死病毒、鳜鱼蛙病毒和鳜弹状病毒三重PCR检测方法的建立

作者：梁红茹; 马赛亚; 付小哲; 林强; 刘礼辉; 牛银杰; 黄志斌; 林蠡; 李宁求^*

来源：西北农林科技大学学报(自然科学版), 2021, 49(11): 17-24.

DOI：10.13207/j.cnki.jnwafu.2021.11.003

• 传染性脾肾坏死病毒
• 鳜鱼蛙病毒
• 鳜弹状病毒
• 三重PCR
• 混合感染

【目的】建立可同时检测传染性脾肾坏死病毒(infectious spleen and kidney necrosis virus, ISKNV)、鳜鱼蛙病毒(Siniperca chuatsi ranairidovirus, SCRIV)和鳜弹状病毒(Siniperca chuatsi rhabdovirus, SCRV)的三重PCR检测方法,为鳜鱼等养殖品种流行病学调查提供方法支撑。【方法】根据ISKNV MCP基因、SCRIV MCP基因和SCRV N基因设计3对特异性引物,对PCR扩增反应中的退火温度和引物用量进行优化,建立可同时检测ISKNV、SCRIV和SCRV的三重PCR方法。为验证该方法的敏感性和特异性(备测病毒为IPNV、GCRV、KHV、SGIV、NNV、TiLV和SVCV),对22份疑似感染ISKNV、SCRIV和SCRV的样品分别进行单一和三重PCR检测。【结果】成功建立了三重PCR检测方法,利用该方法可同时检测ISKNV、SCRIV和SCRV,特异性较好,对IPNV、GCRV、KHV、SGIV、NNV、TiLV、SVCV等无扩增;该方法敏感性好,对3种病毒核酸的检测下限均为0.01 ng/μL;利用该方法和3种病毒单一PCR方法同时对22份临床样品进行检测,结果显示2种方法吻合率为100%,其中ISKNV阳性率为27%、SCRIV阳性率为41%、SCRV阳性率为9%、ISKNV和SCRIV混合感染阳性率均为9%,无ISKNV、SCRIV和SCRV混合感染。【结论】建立的三重PCR检测方法具有特异性强、灵敏度高等特点,可对这3种病毒进行快速鉴别诊断。

• 单位
  仲恺农业工程学院; 中国水产科学研究院珠江水产研究所; 动物科技学院