基于RBL-2H3与P815细胞体外模型的聚山梨酯80、维生素K1注射剂、注射用两性霉素B脂质体类过敏反应潜在风险评价

作者：徐梦婕; 陈华英; 洪敏; 邱云良^*

来源：药物评价研究, 2023, 46(05): 952-961.

• 类过敏反应
• RBL-2H3细胞
• P815细胞
• 细胞脱颗粒
• 聚山梨酯80
• 维生素K1注射剂
• 注射用两性霉素B脂质体
• Annexin V
• Fluo-4AM
• β-氨基己糖苷酶
• 组胺

目的 基于RBL-2H3及P815细胞系，选择Compound 48/80(C48/80)为阳性药构建类过敏反应的体外评价模型，初步评价聚山梨酯80、维生素K1注射剂(VK1I)、注射用两性霉素B脂质体(ABL)导致类过敏反应的潜在风险。方法 应用CCK-8法检测C48/80(10、30、60、100μg·mL-1)、聚山梨酯80(2.5、5.0、10.0、50.0mg·mL-1)、VK1I(0.625、1.250、2.500、5.000、10.000 mg·mL-1)、ABL(0.125、0.250、0.500、1.000、2.000 mg·mL-1)对RBL-2H3、P815细胞活性的影响，计算半数抑制浓度(IC50)，阳性药及受试物均选择<IC50浓度进行后续实验；结合中性红染色形态学观察，研究阳性药及受试物的细胞毒性；流式细胞仪检测Annexin V阳性细胞率及Fluo-4AM标记率；ELISA法检测β-氨基己糖苷酶(β-Hex)及组胺释放量。结果 中性红染色结果显示，在C48/80作用下RBL-2H3、P815细胞部分皱缩或者偶有破损，但大部分细胞仍维持完整细胞形态；在聚山梨酯80、ABL、VK1I高浓度的作用下，RBL-2H3、P815细胞大部分仍能保持正常形态。C48/80在<IC50浓度时能够引起较强的细胞脱颗粒反应，模型建立成功。聚山梨酯80、VK1I在<IC50浓度时均出现了浓度相关性细胞脱颗粒现象，与对照组比较，2种细胞聚山梨酯80 2.5、5.0 mg·mL-1组及VK1I 0.75、1.50、3.00 mg·mL-1组Annexin V阳性率、Fluo-4AM标记率均显著升高(P<0.05、0.01)；聚山梨酯80 2.5、5.0 mg·mL-1组及VK1I1.5、3.0 mg·mL-1组的组胺、β-Hex释放量显著升高(P<0.05、0.01)。ABL组AnnexinV阳性率浓度相关性升高趋势不明显，与对照组比较，仅P815细胞ABL2.00mg·mL-1组显著升高(P<0.05)，且升高幅度不大；与对照组比较，2种细胞ABL 1、2 mg·mL-1组的Fluo-4AM标记率和组胺、β-Hex释放量显著升高(P<0.05、0.01)。结论 聚山梨酯80、VK1I高浓度具有导致类过敏反应产生风险，ABL还需进一步研究。

• 单位
  中国医药工业研究总院