沉默ATG5及ATG7可抑制顺铂介导的耐顺铂睾丸癌细胞的自噬和增殖

作者：朱晨露; 杜家如; 姚言雪; 武丹丹; 苑敏; 干露; 童旭辉^*

来源：南方医科大学学报, 2021, 41(05): 657-663.

• 顺铂
• ATG5
• ATG7
• 自噬
• 耐顺铂睾丸癌细胞

目的观察顺铂作用后,耐顺铂睾丸癌Ⅰ-10/DDP细胞自噬水平的变化;探讨沉默ATG5、ATG7对顺铂作用后的自噬及细胞增殖的影响。方法顺铂(15μmol/L,12 h)作用Ⅰ-10/DDP细胞后,免疫印迹法检测LC3、p62的表达水平;透射电子显微镜和mCherry-GFP-LC3B双标法检测自噬水平。实验分为转染试剂对照组(Mork组)、阴性对照质粒组(NC组)、转染shRNA-ATG5质粒组(shRNA-ATG5组)、转染shRNA-ATG7质粒组(shRNA-ATG7组),免疫印迹法检测ATG5、ATG7的表达。顺铂(15μmol/L,12 h)作用转染组细胞后,免疫印迹法检测LC3、p62的表达;透射电子显微镜、mCherry-GFP-LC3B双标法检测自噬水平;MTT法检测细胞存活率;集落克隆实验检测细胞增殖情况。结果顺铂处理后,Ⅰ-10/DDP细胞中LC3Ⅱ的表达水平明显增加(P=0.001),p62的表达水平降低(P=0.01),自噬体数量增加。与NC组相比,shRNA-ATG5组、shRNA-ATG5组中ATG5、ATG7的表达量明显降低(P=0.005,P<0.001)。与单用顺铂组相比,shRNA-ATG5组与shRNA-ATG7组细胞用顺铂处理后LC3Ⅱ表达水平明显降低(P<0.001),p62的表达水平明显增加(P<0.001),自噬体数量减少、细胞存活率(P<0.001)及克隆形成能力均降低。结论沉默ATG5、ATG7后抑制顺铂介导的自噬,增强顺铂抑制细胞增殖的作用。

• 单位
  蚌埠医学院