ST细胞表达TGEV主要蛋白的研究

作者：王丽; 郭田田; 秦越; 高玉; 孙刘妹; 李海滨; 李一经^*

来源：黑龙江畜牧兽医, 2018, (23): 17-20.

DOI：10.13881/j.cnki.hljxmsy.2018.02.0090

• 猪传染性胃肠炎病毒
• 猪睾丸细胞
• 真核表达
• 转染
• 免疫印迹
• 间接免疫荧光

为了提高猪睾丸(swine testicular,ST)细胞的转染效率,研究猪传染性胃肠炎病毒(Porcine transmissible gastroenteritis virus,TGEV)各蛋白的功能,试验利用绿色荧光蛋白(green fluorescent protein,GFP)的真核表达载体pEGFP-C1转染ST细胞,对ST细胞的转染条件进行优化;然后利用优化后的转染条件将TGEV各蛋白真核表达质粒转染到ST细胞,通过免疫印迹(Western-blot)和间接免疫荧光(IFA)方法检测TGEV各蛋白在ST细胞中的表达情况。结果表明:悬浮细胞转染法(在细胞传代的同时进行转染)比贴壁细胞转染法(待细胞贴壁后再进行转染)的转染效率更高,且转染质粒与转染试剂的比例为1∶3时是转染ST细胞的最佳比例。利用优化后的转染条件将TGEV各蛋白真核表达质粒转染到ST细胞,48 h后采用IFA法检测发现TGEV各蛋白在ST细胞中成功表达,Western-blot法检测发现TGEV各蛋白在ST细胞中表达的大小与预期相符。说明优化后的转染条件可用于提高ST细胞的转染效率。

• 单位
  东北农业大学