血小板病毒灭活后深低温保存的可行性研究

作者：郭梓璇; 施琳颖; 李艳辉; 单桂秋^*

来源：第三军医大学学报, 2021, 43(16): 1513-1520.

DOI：10.16016/j.1000-5404.202103023

• 血小板
• 病毒灭活
• UVB
• 核黄素
• 光化学法
• 深低温保存

目的探讨新鲜血小板经核黄素光化学法病毒灭活后进行深低温保存的可行性。方法采集本院O型健康无偿献血者单采血小板共24 U。实验分为4个组:A为新鲜血小板对照组,B为血小板病毒灭活组(核黄素光化学法灭活处理), C为新鲜血小板的深低温保存组(-80℃保存), D为病毒灭活血小板的深低温保存组(核黄素光化学法灭活处理后-80℃保存)。用150μmol/L的核黄素结合1.5 J/cm2的UVB光源对血小板进行病毒灭活。深低温保存后隔日定义为第1天,取样通过扫描电镜观察血小板超微结构的变化;第1、3、5、7天取样检测血小板数量、质量、功能与代谢相关指标。使用全自动血常规计数仪检测血小板计数(platelet count, PLT)和平均血小板体积(mean platelet volume, MPV),使用比色法观察低渗休克反应能力(hypotonic shock response, HSR)变化;使用Annexin V-FITC和CD62p-PE试剂盒和流式细胞术检测细胞凋亡和激活情况;使用血栓弹力图试验(thromboelastogram test, TEG)检测功能变化,记录最大振幅(maximum amplitude, MA)值;使用速率法检测葡萄糖、乳酸变化。综合评估血小板病毒灭活后深低温保存的可行性。结果与A组相比较,扫描电镜中B、C、D组血小板伸出伪足数量增多,形状不规则,有明显激活现象;4组MPV均随着保存时间的延长而增大,C、D组明显大于A、B组;4组HSR能力均随着保存时间的延长逐渐降低,C、D组明显不如A、B组;4组的CD62p和Annexin V阳性率中均随着储存时间的延长而增加,D组凋亡与激活现象最明显;组间MA值变化没有统计学差异;A、B组葡萄糖水平均随着储存时间的延长呈明显下降;乳酸含量与葡萄糖含量变化基本相反。综合分析,深低温保存对血小板形态和质量指标的有一定的影响,深低温保存过程对血小板形态和质量指标影响明显大于病毒灭活过程,但其功能和代谢指标变化不明显。结论核黄素/UVB光化学法病毒灭活的血小板进行深低温保存存在一定可行性。

• 单位
  广州中医药大学