鸡毒害艾美耳球虫表面抗原基因(EnSAG)的克隆表达及其免疫保护力

作者：张阿敏; 李静怡; 刘丹丹; 高阳; 王礼跃; 樊峥嵘; 李颖珊; 冯茜茜; 张知之; 范雪莲; 侯照峰; 许金俊; 陶建平^*

来源：畜牧与兽医, 2022, 54(10): 122-128.

• 毒害艾美耳球虫
• 表面抗原基因
• 克隆
• 表达
• 免疫保护力

为了研究鸡毒害艾美耳球虫表面抗原基因(EnSAG)的功能，以毒害艾美耳球虫(扬州株)第二代裂殖子的总RNA为模板，RT-PCR扩增其EnSAG,连接至pGEM-T-Easy载体，鉴定后构建pET28a(+)-EnSAG表达载体，转化至大肠杆菌BL21,鉴定后进行诱导表达和纯化。用纯化重组蛋白免疫BALB/c小鼠，制备抗EnSAG蛋白的多克隆抗体。利用多克隆抗体，用Western blot技术检测子孢子和第二代裂殖子中的天然EnSAG蛋白。用重组蛋白按高剂量(200μg/羽)、中剂量(100μg/羽)和低剂量(50μg/羽)免疫雏鸡，同时设置未免疫攻虫组和未免疫未攻虫组为对照，以成活率、平均增重、相对增重率、卵囊减少率、病变记分和抗球虫指数(ACI)为指标，评价重组蛋白的免疫保护力。结果显示：该基因全长768 bp,编码255个氨基酸，分子质量24.63 ku;重组蛋白大小约为30 ku,以包涵体形式为多，能被组氨酸单抗和鸡抗毒害艾美耳球虫阳性血清特异性识别；在第二代裂殖子中检测到天然EnSAG蛋白，其分子质量大约为27 ku。各试验组的成活率均为100%;免疫组的平均增重增加，病变记分显著降低(P<0.05);低剂量组相对增重率最高(86.19%);高剂量组卵囊减少率(61.54%)和ACI值(160.03)最高。本研究结果为进一步探析EnSAG蛋白的功能以及鸡球虫病亚单位疫苗研制奠定了基础。

• 单位
  扬州大学