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摘要
目的：探讨乌梅总黄酮(FMF)调控微小RNA (miR)-145-3p对多巴胺能毒素1-甲基-4-苯基吡啶(MPP+)诱导的SH-SY5Y细胞损伤的保护作用，并阐明其作用机制。方法：构建MPP+诱导帕金森病(PD) SH-SY5Y细胞模型，CCK-8法筛选MPP+和FMF最佳干预浓度和作用时间。将细胞分为对照组(未经处理)、模型组(500μmol·L-1 MPP+作用24 h)、MPP++mimics组(转染miR-145-3p mimics)、MPP++NC组(转染miR-145-3p NC)、MPP++FMF组(0.25 g·L-1 FMF作用24h)、 MPP++mimics+FMF组(转染miR-145-3pmimics后0.25g·L-1FMF作用24h)和MPP++NC+FMF组(转染miR-145-3p NC后0.25 g·L-1 FMF作用24 h)。CCK-8法检测各组细胞增殖能力，AnnexinⅤ-FITC/PI染色法检测各组细胞凋亡率，透射电镜观察各组细胞线粒体自噬超微结构表现，实时荧光定量PCR (RT-qPCR)法检测各组细胞中miR-145-3p表达水平，Western blotting法检测各组细胞中Beclin-1蛋白表达水平和LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ比值。结果：不同浓度MPP+作用SH-SY5Y细胞后，细胞增殖能力明显降低(P<0.01),PD细胞模型构建成功。MPP+最佳作用浓度和时间为500μmol·L-1和24 h,FMF最佳干预浓度和作用时间为0.25 g·L-1和24 h。CCK-8法检测，与对照组比较，模型组细胞增殖能力明显降低(P<0.01)；与模型组比较，MPP++mimics组和MPP++FMF组细胞增殖能力均明显升高(P<0.01)；与MPP++FMF组比较，MPP++mimics+FMF组细胞增殖能力明显升高(P<0.01)。AnnexinⅤ-FITC/PI染色法检测，与对照组比较，模型组细胞凋亡率明显升高(P<0.01)；与模型组比较，MPP++mimics组和MPP++FMF组细胞凋亡率均明显降低(P<0.01)；与MPP++FMF组比较，MPP++mimics+FMF组细胞凋亡率明显降低(P<0.01)。透射电镜观察，对照组细胞线粒体形态均匀，结构完整；模型组细胞线粒体体积变大，结构不规则，出现空化现象；与模型组比较，MPP++mimics组和MPP++FMF组细胞线粒体结构改善，自噬小体数量增加；与MPP++FMF组比较，MPP++mimics+FMF组细胞线粒体结构较为完整，自噬小体数量进一步增加。RT-qPCR法检测，与对照组比较，模型组细胞中miR-145-3p表达水平明显降低(P<0.01)；与模型组比较，MPP++mimics组和MPP++FMF组细胞中miR-145-3p表达水平均明显升高(P<0.01)；与MPP++FMF组比较，MPP++mimics+FMF组细胞中miR-145-3p表达水平明显升高(P<0.01)。Western blotting法检测，与对照组比较，模型组细胞中Beclin-1蛋白表达水平和LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ比值均降低(P<0.05)；与模型组比较，MPP++mimics组和MPP++FMF组细胞中Beclin-1蛋白表达水平和LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ比值均明显升高(P<0.01)；与MPP++FMF组比较，MPP++mimics+FMF组细胞中Beclin-1蛋白表达水平和LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ比值均明显升高(P<0.01)。结论：FMF能够促进MPP+诱导的SH-SY5Y细胞自噬作用，减轻线粒体功能障碍，缓解MPP+诱导的SH-SY5Y细胞损伤，其作用机制与上调miR-145-3p表达有关。
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单位广西中医药大学; 广西中医药大学附属瑞康医院
