A型魏氏梭菌α毒素羧基端蛋白基因表达与结构分析

作者：许崇利; 许崇波; 佘玉罕^*

来源：扬州大学学报（农业与生命科学版）, 2020, 41(04): 40-45.

DOI：10.16872/j.cnki.1671-4652.2020.04.007

• A型魏氏梭菌
• α毒素
• CPA251-370基因
• 结构分析

利用PCR技术将α毒素羧基端基因CPA251-370克隆到pET-32a载体上,构建了重组表达质粒pXETCPA-C,酶切鉴定和序列分析证实其含有CPA251-370基因且序列和阅读框架均正确。对重组菌株BL21(DE3)(pXETCPA-C)表达的蛋白质进行SDS-PAGE分析,结果表明CPA251-370蛋白表达量占菌体总蛋白质相对含量的16.43%。SOPMA法预测表明CPA251-370蛋白二级结构主要由β折叠和无规则卷曲组成,其3D结构与α毒素羧基端部分相似。CPA和CPA251-370蛋白的圆二色(CD)光谱分析发现两者的CD光谱仅有一些微小变化。免疫攻毒试验表明CPA251-370蛋白免疫的小鼠能抵抗最小致死剂量(MLD) 0.5 mL·只-1(活菌数约为5×109 cfu)的A型魏氏梭菌标准株C57-1毒素攻击。该研究深入阐释了A型魏氏梭菌α毒素的分子结构,为揭示其作用的分子机制奠定了坚实基础。

• 单位
  韶关学院; 重庆医药高等专科学校