人表皮朗格汉斯细胞的分离纯化及其对咪喹莫特免疫刺激作用的反应

作者：骆丹; 缪旭; 吉玺; 吴迪; 徐丽贤; 朱洁; 林向飞

来源：中国免疫学杂志, 2007, (02): 146-150.

• 朗格汉斯细胞(LC)
• 密度梯度离心
• 免疫磁珠
• 咪喹莫特
• 细胞因子

目的:探讨获取较高纯度和活性人表皮朗格汉斯细胞(Langerhans cell,LC)的实验方法,并观察分选所获人表皮LC接受免疫调节剂咪喹莫特刺激后细胞因子mRNA表达的变化。方法:联合采用密度梯度离心和免疫磁珠的方法分离纯化人表皮LC,将分选后的细胞用结合有FITC的鼠抗人CD1a单抗标记,经流式细胞仪检测LC纯化率,采用0.4%台盼蓝染色检测细胞的活性。将人表皮LC分为实验组和对照组,实验组加5μg/ml咪喹莫特,对照组不加药,处理4小时后提取总RNA,采用RT-PCR法检测各组细胞中细胞因子TNF-α、IL-1β及IL-6mRNA的表达量。结果:流式细胞仪检测分选后LC纯化率为84.48%,台盼蓝染色显示细胞活性>95%。LC经咪喹莫特处理后的实验组TNF-α、IL-1β及IL-6三种细胞因子mRNA表达量均较对照组显著增高(P<0.05)。结论:联合应用密度梯度离心和免疫磁珠法,可获得较高纯度、有活性的LC细胞,且具有操作简单、易于无菌条件下分离纯化的优点。LC能接受咪喹莫特刺激而上调细胞因子mRNA的表达。

• 单位
  南京医科大学第一附属医院