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摘要
目的 观察灵仙新苷（C-AR）对体外培养的膝骨关节炎（KOA）软骨细胞凋亡及自噬的影响，探讨其改善KOA的作用机制。方法 从接受全膝关节置换术的KOA患者软骨组织提取软骨细胞，通过甲苯胺蓝及Ⅱ型胶原免疫荧光染色鉴定软骨细胞。将细胞分为对照组、模型组、和C-AR组，对照组不予干预，模型组和C-AR组采用白细胞介素（IL）-1β诱导24 h构建KOA模型，C-AR组造模前用30μmol/L C-AR预处理1 h。CCK8法检测细胞活性，ELISA检测细胞IL-6和IL-8含量，流式细胞术检测活性氧（ROS）含量和细胞凋亡率，Western blot检测Bax、半胱氨酸蛋白酶-3(Caspase-3)、Bcl-2、Beclin1、LC3B蛋白表达，qRT-PCR检测Bax、Caspase-3、Bcl-2 mRNA表达，免疫荧光检测LCB表达。结果 与对照组比较，模型组软骨细胞IL-6和IL-8含显著增加（P<0.01）,ROS含量和细胞凋亡率显著升高（P<0.01）,Bax、Caspase-3 mRNA和蛋白表达显著升高（P<0.01）,Bcl-2 mRNA和蛋白表达显著降低（P<0.01）,Beclin1、LC3B蛋白表达及LC3BⅡ/LC3BⅠ比值显著降低（P<0.01）；与模型组比较，C-AR组软骨细胞IL-6和IL-8含量显著减少（P<0.05）,ROS含量和细胞凋亡率显著降低（P<0.01）,Bax、Caspase-3 mRNA和蛋白表达显著降低（P<0.01）,Bcl-2 mRNA和蛋白表达显著升高（P<0.01）,Beclin1、LC3B蛋白表达及LC3BⅡ/LC3BⅠ比值显著升高（P<0.01）。结论 C-AR可减轻体外培养的KOA软骨细胞炎症反应，降低细胞凋亡率，其机制可能与激活自噬有关。
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