组织因子途径抑制因子/绿色荧光蛋白双顺反子真核表达载体的构建及其在NIH 3T3细胞中的表达

作者：宋丽萍; 楼莎; 朱敦皖; 刘兰霞; 张海玲; 董霞; 董庭婷; 冷希岗

来源：生物医学工程与临床, 2011, (02).

• 组织因子途径抑制因子
• 绿色荧光蛋白
• 双顺反子表达载体
• 血管再狭窄 tissue factor pathway inhibitor
• green fluorescent protein
• bicistronic expression vector
• restenosis

目的 构建含人组织因子途径抑制因子（TFPI）和绿色荧光蛋白（GFP）基因的双顺反子真核表达载体，并验证其在NIH 3T3细胞中的表达，为血管再狭窄的防治提供一个具有示踪和治疗双重作用的有效载体。方法 以含有全长eDNA的pIRES-TFPI为模板，PCR扩增TFPI全长cDNA，经酶切后插入到pIRES2-AcGFPI-Nuc载体中，构建成双顺反子真核表达载体，重组质粒径酶切图谱分析、PCR扩增及测序鉴定后命名为pIRES2-AcGFPI-Nuc-TFPI。将其转染NIH 3T3细胞，采用荧光显微镜观察GFP在细胞中的表达，以RT-PCR检测TFPI在细胞内的表达。结果 经酶切图谱分析、PCR扩增及DNA测序证实双顺反子真核表达载体构建正确；荧光显微镜可观察到细胞内GFP的表达；RT-PCR证实经TFPI基因转染的细胞内TFPI mRNA表达增高。结论 成功构建了包括TFPI和GFP的真核双表达载体，并使其在NIH 3T3细胞中顺利表达。

• 单位
  中国医学科学院北京协和医院; 北京协和医学院