PCGF1蛋白的表达、纯化及其单克隆抗体的制备与鉴定

作者：李辉; 吴旭东; 龚燕华; 阴彬

来源：细胞与分子免疫学杂志, 2011, (01): 71-73.

DOI：10.13423/j.cnki.cjcmi.005821

• PCGF1
• 单克隆抗体
• 杂交瘤技术 PCGF1
• monoclonal antibody
• hybridoma technique

目的:原核表达人表观抑制因子Polycomb家族成员PCGF1蛋白片段,并制备其鼠源单克隆抗体(mAb)。方法:应用PCR技术扩增人PCGF1基因编码区部分序列(CDS区第382～567bp的DNA片段)并插入到pET-32a(+)质粒中,在大肠杆菌BL21中进行His-PCGF1-128/189融合蛋白(简写为His-N128/189)的原核表达。利用所表达的融合蛋白中含有的6×His标签进行亲和层析纯化。用所获得的纯化蛋白免疫BALB/c小鼠,利用杂交瘤技术,分别通过ELISA和Western blot法筛选稳定分泌抗体的杂交瘤细胞株,用免疫双向扩散法鉴定mAb的Ig亚类。取1株杂交瘤细胞...

• 单位
  中国人民武装警察部队后勤学院; 中国医学科学院基础医学研究所; 生物化学教研室; 医学分子生物学国家重点实验室