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摘要
目的构建Survivin的短发夹RNA表达质粒并通过由其介导的RNA干扰来下调神经母细胞瘤细胞株SH-SY5Y细胞中Survivin的表达。方法针对人Survivin的mRNA序列设计合成两对寡核苷酸序列,退火后将其连入pBSHH1,对重组质粒pBSHH1-S1和pBSHH1-S2进行酶切和测序鉴定,然后将质粒转染SH-SY5Y细胞,运用RT-PCR和Western印迹检测Survivin基因的表达。结果酶切和测序证实目的寡核苷酸片段已被克隆到pBSHH1,pBSHH1-S1和pBSHH1-S2转染SH-SY5Y细胞后,Survivin基因的mRNA以及蛋白水平的表达量均受到明显抑制。结论成功构建了人Survivin基因的短发夹RNA表达质粒,并在SH-SY5Y细胞中验证了它们对Survivin基因的表达抑制作用,为神经母细胞瘤等肿瘤的基因治疗研究奠定了基础。
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