siRNA抑制Ku80表达后对宫颈癌HeLa细胞增殖的影响

作者：庄亮; 于世英; 黄晓园; 高庆蕾; 熊华; 冷彦

来源：癌症, 2007, (03): 252-257.

DOI：10.3969/j.issn.1000-467X.2007.03.006

• Ku80
• 小干扰RNA
• 稳定转染
• 细胞增殖
• 宫颈肿瘤
• HeLa细胞

背景与目的:Ku80为细胞受辐射后DNA双链断裂(DNA doublestrand break,DSB)的主要修复蛋白。现阶段关于Ku80的研究主要集中在DSB修复方面,其他方面研究较少。本研究建立利用siRNA抑制Ku80表达的宫颈癌HeLa细胞模型,以此探讨Ku80在细胞增殖方面的作用。方法:构建靶向抑制Ku80的siRNA表达载体,转染HeLa细胞,筛选稳定表达siRNA的转化克隆;Western blot检测Ku80表达变化;克隆形成实验、MTT法和裸鼠皮下瘤形成实验分别检测细胞克隆形成率及细胞在体外和体内的增殖情况。结果:构建表达质粒pKu80-siRNA与pNeg-siRNA转染HeLa细胞,G418筛选后获得稳定转染克隆,Western blot分析表明转染pKu80-siRNA后的细胞Ku80蛋白表达受到明显抑制,将其命名为HeLa/Ku80-siRNA;转染pNeg-siRNA的HeLa细胞克隆形成率为0.62±0.02,而HeLa/Ku80-siRNA细胞的克隆形成率为0.46±0.05,明显低于对照细胞(t=5.11,P<0.01);MTT显示细胞培养48h和72h时,HeLa/Ku80-siRNA细胞的增殖率均显著低于对照细胞(P<0.05);裸鼠皮下瘤生长实验示种植25天时,HeLa/Ku80-siRNA细胞种植瘤的平均体积为(18.92±3.60)mm3,明显低于对照细胞种植瘤体积(194.88±30.61)mm3,(t=12.69,P<0.01)。结论:稳定转染及siRNA技术建立的Ku80表达抑制克隆可以成为简单实用的细胞模型;Ku80-siRNA抑制Ku80的表达后可以在体内外抑制HeLa细胞的增殖。

• 单位
  华中科技大学同济医学院附属同济医院