大豆花叶病毒半夏分离物侵染性克隆构建及鉴定

作者：张丽; 王德富; 裴燕妮; 咸珅; 牛颜冰^*

来源：生物工程学报, 2020, 36(05): 949-958.

DOI：10.13345/j.cjb.190439

• 侵染性克隆
• 大豆花叶病毒
• Gibson组装
• 多聚腺苷酸尾
• 半夏

大豆花叶病毒(Soybean mosaic virus,SMV)作为半夏(Pinellia ternata (Thunb.) Breit.)主要病毒病害之一,已对其产量和品质造成严重影响。构建病毒侵染性克隆是反向遗传学研究病毒基因功能、病毒与宿主相互作用的有力工具,为明确SMV侵染半夏的分子机制,开展SMV全长cDNA侵染性克隆的构建特别重要。因此文中利用Gibson体外重组系统对大豆花叶病毒山西半夏分离物(SMV-SXBX)侵染性克隆进行组装,通过农杆菌浸润法接种健康半夏;进一步通过机械传代、逆转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)证实SMV-SXBX侵染性克隆3′末端含有poly(A)尾56 nt时具有稳定侵染性。该方法便捷、高效,且避免了SMV侵染性克隆在大肠杆菌中的不稳定问题。SMV全长侵染性cDNA克隆的构建,为进一步研究SMV复制和发病的分子机制奠定了基础。

• 单位
  生命科学学院; 山西农业大学