外源性Smad7基因小鼠肺内定向表达的研究

作者：王丽; 冯炎; 傅小龙; 蔡旭伟

来源：中华医学杂志, 2006, (26): 1817-1822.

• 肺纤维化
• 基因疗法
• 肿瘤

目的探讨放射线诱导Egr-1基因启动子调控腺病毒介导的Smad7基因在小鼠肺内表达的规律性、其表达的细胞内定位及小鼠耐受性。方法将Egr-1基因启动子的放射敏感元件和Smad7 cDNA包装到复制缺陷型腺病毒内,制备成AD．Egr-Smad7。120只C57BL／6J小鼠随机分组进入实验,每组6只。小鼠气管内给药,24 h后单次全胸放射。(1)66只分为11组:生理盐水组、AD．Egr-Smad7及未包装Egr-Smad7腺病毒(各分5个不同病毒滴度)组,观察给药后呼吸困难、紫绀情况及72 h内死亡情况,研究重组腺病毒滴度与小鼠急性耐受性关系。(2)36只分为6组:空白对照(C)组、单纯放射(R)组、AD．Egr-Smad7未放射(RA)组、AD．Egr-Smad7放射(RAR)组、未包装Egr-Smad7病毒未放射(AV)组及未包装Egr-Smad7病毒放射(AVR)组,放射8 Gy,5 h后免疫组织化学法检测外源性Smad7基因肺内表达的细胞内定位。(3)168只分为28组:C组、R组、RA组、BAR组、AV组及AVR组(各组按照腺病毒滴度又分为1×108、5×108、1×109 pfu／0．1 ml组,按照放射后时间又分为6 h及9 h组),放射8 Gy,研究重组腺病毒滴度与外源性Smad7基因肺内表达的关系。(4)324只分为54组:C组、R组、RA组、RAR组、AV组及AVR组(各组按照射后时间又分为放射后0、1、2、3、5、7、9、12及15 h组),放射8 Gy,研究照射后不同时间Smad7基因肺内表达的时效关系。(5)126只分为21组:C组、R组、RA组、RAR组、AV组及AVR组(各放射组按放射剂量又分为5、8、10、12、15及20 Gy组),照射后5 h研究Smad7基因肺内表达与放射剂量的关系。采用Western印迹法检测小鼠肺组织Smad7蛋白表达。结果重组腺病毒滴度在109pfu及以下时,小鼠可安全耐受,各组6只均存活,而5×109pfu及以上组小鼠5只以上死亡。AVR组外源性Smad7基因在肺泡上皮细胞、血管内皮细胞及细支气管上皮细胞胞浆内均有明显表达,而各对照组未见表达。外源性Smad7基因表达随重组腺病毒滴度升高而增加(P<0．01);单次放射0-12 Gy间其表达随放射剂量升高而增加,15 Gy时下降;放射后2-9 h其表达量最高(P<0．05),而后降低,15 h降至接近正常水平。结论重组腺病毒滴度在109pfu及以下时,小鼠可安全耐受。以腺病毒为载体,辐射诱导Egr-1启动子能够调控外源性Smad7基因在小鼠肺组织各种细胞胞质内广泛表达,外源性Smad7基因表达随重组病毒滴度升高而增加,并与放射剂量及放射后间隔时间有关。

• 单位
  复旦大学附属肿瘤医院; 复旦大学