摘要
目的:制备一种应用于细胞制剂中丙型肝炎病毒(HCV)、人类免疫缺陷病毒1型和2型(HIV-1/2)、人类T细胞白血病病毒1型和2型(HTLV-1/2)五种RNA病毒核酸检测的阳性质控品,即装载上述五种病毒核酸的假病毒5V(5V)。方法:将上述病毒的部分基因片段连接成一条基因,与MS2噬菌体部分基因共同插入原核表达载体中构建pACYCDuet-1-MS2/5Virus重组质粒,转化到E.coli BL21(DE3)感受态中表达并鉴定;表达产物纯化浓缩,电镜分析5V形态;对5V进行DNase I、RNase A抗性及保存期的稳定性试验。结果:重组基因有效表达,5V纯度高无杂带;5V成功包装目的基因序列,具有明显的病毒结构特征;5V能抵抗高浓度的DNase I和RNase A的降解,在-20℃稳定保存6个月。结论:制备的5V稳定,达到了作为细胞制剂中RNA病毒核酸检测阳性质控品的基本要求。
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单位生命科学学院; 中国计量大学