摘要

目的 优化紫花地丁总香豆素的提取工艺,并评价其纯化物的体外抗氧化活性和抗肿瘤活性。方法 在单因素实验的基础上,以紫花地丁总香豆素得率为响应值,以液料比、提取时间、乙醇体积分数为变量,采用响应面法优化紫花地丁总香豆素的提取工艺并验证。采用1,1-二苯基-2-三硝基苯肼(DPPH)法、2,2′-联氮双(3-乙基苯并噻唑啉-6-磺酸)二铵盐(ABTS)法和2-苯基-4,4,5,5-四甲基咪唑啉-3-氧代-1-氧(PTIO)法评价紫花地丁总香豆素纯化物的抗氧化活性。采用CCK-8法检测其对人宫颈癌细胞HeLa、人胆管细胞型肝癌细胞HCCC-9810、人肝癌细胞HepG2、人乳腺癌细胞MDA-MB-231和人非小细胞肺癌细胞A549的抑制作用;采用Hoechst 33258染色法检测其对HCCC-9810细胞凋亡形态的影响,并测定细胞中乳酸脱氢酶(LDH)和超氧化物歧化酶(SOD)含量。结果 最优提取工艺为液料比25∶1(mL/g)、提取时间1.9 h、乙醇体积分数68%;3次验证实验的紫花地丁总香豆素平均得率为(21.10±0.17)mg/g,RSD为0.80%(n=3),与预测值(20.79 mg/g)的相对误差为1.49%。紫花地丁总香豆素纯化物对DPPH和ABTS自由基的半数抑制浓度(IC50)分别为21.54、17.11μg/mL,略高于抗坏血酸的15.21、12.45μg/mL;对PTIO自由基的IC50为1 422.01μg/mL,远高于抗坏血酸的37.20μg/mL;对上述5种细胞的IC50分别为(113.18±15.97)、(51.17±1.72)、(134.15±11.75)、(171.83±15.27)、(93.38±4.65)μg/mL;能促进HCCC-9810细胞凋亡,增加其LDH含量并降低SOD含量。结论 成功优化了紫花地丁总香豆素的提取工艺;所得提取物的纯化物具有抗氧化活性和抗肿瘤活性。