科研之友
微信
新浪微博
Facebook
分享链接
摘要
为获得旋毛虫（T1）脱氧核糖核酸酶Ⅱ（DNase Ⅱ）蛋白，观察其在肌幼虫虫体中的分布，以旋毛虫（T1）肌幼虫cDNA为模板，利用RT-PCR技术扩增旋毛虫脱氧核糖核酸酶Ⅱ（TsDNase Ⅱ）蛋白的编码基因tsdnase Ⅱ，将其克隆到原核表达载体pCold-TF中，转化至大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞中，以IPTG诱导表达，表达产物进行SDS-PAGE电泳分析；利用酶联免疫吸附试验（ELISA）及Western blot分析重组Ts DNaseⅡ（rTsDNase Ⅱ）蛋白的反应原性；将rTsDNase Ⅱ蛋白免疫6-8周BALB/c小鼠，制备其多克隆抗体；制作旋毛虫肌幼虫冰冻切片，利用免疫荧光试验观察TsDNase Ⅱ蛋白在虫体中的分布。结果，成功地扩增出了长度为942 bp的旋毛虫tsdnase Ⅱ基因片段，构建了其原核表达质粒pCold-TF-tsdnase Ⅱ；转化了重组表达质粒的大肠杆菌BL21(DE3)成功可溶表达了rTsDNase Ⅱ，大小为86 kDa;ELISA与Western blot分析结果显示，rTsDNase Ⅱ蛋白能与感染旋毛虫的小鼠血清发生特异性反应；冰冻切片免疫荧光分析显示，TsDNase Ⅱ分布于旋毛虫肌幼虫整个虫体。研究结果为进一步分析TsDNase Ⅱ的特性与功能、利用该蛋白研发旋毛虫病新型防控策略打下了基础。
- 单位
