犬瘟热病毒实时荧光RT-RPA检测方法的建立及应用

作者：张启龙; 傅彩霞; 张玮; 高晓龙; 王林; 程敏姮; 郑雪莹; 刘海莹; 周德刚^*

来源：动物医学进展, 2020, 41(11): 19-23.

DOI：10.16437/j.cnki.1007-5038.2020.11.004

• 犬瘟热病毒
• 实时荧光
• 反转录-重组酶聚合酶等温扩增
• 检测

为建立犬瘟热病毒(CDV)临床快速检测方法,针对CDV保守N基因依据重组酶聚合酶等温扩增(RPA)引物设计原理进行RPA引物探针设计,通过反应条件优化、敏感性试验、特异性试验和临床样品检测,建立了CDV实时荧光RT-RPA检测方法。结果显示,反应体系中M-MLV反转录酶最适浓度为4 U/μL,所建CDV实时荧光RT-RPA检测方法特异性较好,敏感性最低可检测到5.68×102 copies/μL,高于国标RT-PCR(GB/T 27532-2011)检测方法。建立的CDV实时荧光RT-RPA检测方法具有较高的敏感性和特异性、操作简便、20 min内判定结果,可用于临床犬瘟热快速诊断,对犬瘟热的防控具有重要意义。