携带丙型肝炎病毒非结构蛋白3基因的重组腺病毒构建研究

作者：周陶友; 陈敏; 李卫华; 赵连三; 何芳; 刘丽; 唐红

来源：中华医院感染学杂志, 2005, 15(09): 973-976.

DOI：10.3321/j.issn:1005-4529.2005.09.004

• 丙型肝炎病毒
• 非结构蛋白3
• 重组腺病毒疫苗
• 基因治疗

目的构建表达丙型肝炎病毒(HCV)非结构蛋白3(NS3)的复制缺陷型重组腺病毒,为防治HCV感染的基因免疫和基因治疗提供实验基础。方法将HCV NS3基因定向克隆到穿梭质粒pAdTrack-CMV上,经与腺病毒骨架质粒pAdEasy-1在大肠埃希菌BJ5183内同源重组后,转染293细胞进行包装,并反复感染293细胞进行扩增。结果通过PCR扩增、酶切、核酸测序及Western杂交法检测鉴定,均证实插入穿梭质粒中的片段为HCV NS3基因(基因型1b);所包装出的复制缺陷型重组腺病毒AdEasy-GFP-NS3具有良好的感染能力,并可在293细胞中表达HCV NS3蛋白。结论AdEasy-GFP-NS3携带有HCV NS3基因,能有效地感染293细胞并高效表达,从而为丙型肝炎基因疫苗的进一步研究奠定了基础。

• 单位
  四川大学华西医院