曲古抑菌素A联合厄洛替尼对肺腺癌细胞株PC-9/ER增殖及凋亡的影响

作者：张群成; 刘庆亮; 安云霞

来源：新乡医学院学报, 2020, 37(05): 404-409.

• 曲古抑菌素A
• 厄洛替尼
• E-钙黏蛋白
• 磷酸化表皮生长因子受体

目的探讨曲古抑菌素A联合厄洛替尼对获得性耐厄洛替尼肺腺癌细胞株PC-9/ER增殖、凋亡及耐药性的影响。方法取对数生长期PC-9/ER细胞,接种于96孔培养板,将细胞分为0. 0、2. 5、5. 0、10. 0、20. 0μmol·L-1厄洛替尼组和曲古抑菌素A+0. 0μmol·L-1厄洛替尼组、曲古抑菌素A+2. 5μmol·L-1厄洛替尼组、曲古抑菌素A+5. 0μmol·L-1厄洛替尼组、曲古抑菌素A+10. 0μmol·L-1厄洛替尼组、曲古抑菌素A+20. 0μmol·L-1厄洛替尼组; 0. 0、2. 5、5. 0、10. 0、20. 0μmol·L-1厄洛替尼组细胞分别加入对应浓度的厄洛替尼100μL,曲古抑菌素A联合厄洛替尼组分别加入250 nmol·L-1的曲古抑菌素A 100μL和对应浓度的厄洛替尼100μL,48 h后采用四甲基偶氮唑盐法检测各组细胞增殖抑制率。取对数生长期PC-9/ER细胞接种于6孔板,将细胞分为厄洛替尼组和曲古抑菌素A+厄洛替尼组;厄洛替尼组细胞给予20μmol·L-1厄洛替尼100μL,曲古抑菌素A+厄洛替尼组细胞给予250 nmol·L-1曲古抑菌素A 100μL和20μmol·L-1厄洛替尼100μL进行处理,24 h后采用流式细胞术检测2组细胞周期分布情况。取对数期PC-9/ER细胞分为空白对照组、曲古抑菌素A组、厄洛替尼组、曲古抑菌素A+厄洛替尼组;空白对照组细胞给予二甲基亚砜100μL,曲古抑菌素A组细胞给予250 nmol·L-1曲古抑菌素A 100μL,厄洛替尼组细胞给予20μmol·L-1厄洛替尼100μL,曲古抑菌素A+厄洛替尼组细胞给予250 nmol·L-1曲古抑菌素A 100μL和20μmol·L-1厄洛替尼100μL处理细胞,24 h后采用免疫荧光细胞化学法检测4组细胞中E-钙黏蛋白(E-cadherin)的表达并观察PC-9/ER细胞凋亡情况,Western blot法检测4组细胞中磷酸化表皮生长因子受体(p-EGFR)、E-cadherin及Cleaved-caspase-3蛋白的表达。结果不同浓度厄洛替尼联合曲古抑菌素A对PC-9/ER细胞增殖的抑制作用均强于单用厄洛替尼组(P <0. 05)。不同浓度厄洛替尼联合曲古抑菌素A对PC-9/ER细胞抑制作用的联用指数均<1,二者具有协同作用。曲古抑菌素A+厄洛替尼组G2/M期细胞所占的比例高于厄洛替尼组,G0/G1和S期细胞所占比例低于厄洛替尼组(P <0. 05)。曲古抑菌素A+厄洛替尼组PC-9/ER细胞中E-cadherin蛋白的表达水平高于空白对照组、厄洛替尼组和曲古抑菌素A组。Hoechst33258染色结果显示,曲古抑菌素A+厄洛替尼组细胞核染色强度明显增加,细胞凋亡现象多于空白对照组、厄洛替尼组和曲古抑菌素A组。厄洛替尼组、曲古抑菌素A组和厄洛替尼+曲古抑菌素A组细胞中p-EGFR、Cleaved-caspase-3、E-cadherin蛋白表达水平均高于空白对照组(P <0. 05),曲古抑菌素A组和厄洛替尼+曲古抑菌素A组细胞中p-EGFR、Cleaved-caspase-3、E-cadherin蛋白表达水平高于厄洛替尼组(P <0. 05),厄洛替尼+曲古抑菌素A组细胞中p-EGFR、Cleaved-caspase-3、E-cadherin蛋白表达水平高于曲古抑菌素A组(P <0. 05)。结论曲古抑菌素A联合厄洛替尼可以促进PC-9/ER细胞凋亡,其机制可能为通过促进E-cadherin表达而抑制信号转导通路,促进肿瘤细胞凋亡。

• 单位
  河南省人民医院