葡萄病毒A实时荧光定量RT-PCR检测技术的建立及应用

作者：任芳; 董雅凤^*; 张尊平; 范旭东; 胡国君

来源：园艺学报, 2018, 45(11): 2243-2253.

DOI：10.16420/j.issn.0513-353x.2018-0124

• 葡萄
• 葡萄病毒A
• 检测
• 实时荧光定量RT-PCR
• 常规RT-PCR

根据文献报道和GenBank已登录序列设计引物建立了葡萄病毒A(Grapevine virus A,GVA)SYBRGreenⅠ染料法实时荧光定量RT-PCR检测技术体系。该技术标准曲线循环阈值与模板浓度呈现良好线性关系,扩增效率为99.2%,决定系数为0.999,可特异性检测GVA,灵敏度高(达常规RT-PCR的100倍),重复性好。对不同季节、不同品种以及不同部位葡萄样品(嫩叶、嫩叶柄、老叶、老叶柄、卷须和休眠枝条)中GVA的检出率普遍高于常规RT-PCR。不同季节间比较,对秋、冬季样品检测效果最好,除嫩叶外其余部位检出率均达100%,春夏季检出率为10%～100%。不同部位间比较,老叶柄和休眠枝条检测效果最好,检出率均达100%,其次为老叶(80%～100%),其余部位样品检出率为10%～100%。在大量田间样品检测中,休眠枝条样品检测结果与常规RT-PCR一致,而秋季老叶柄样品检出率明显高于常规RT-PCR。

• 单位
  中国农业科学院果树研究所