山羊痘病毒P32基因真核表达载体的构建及表达

作者：谢芳; 张强; 颜新敏; 吴国华; 李健; 朱海霞; 郭爱疆; 韩若婵; 施程洪; 鞠厚斌; 朱彩珠; 岳城; 才学鹏

来源：新疆农业大学学报, 2008, (03): 1-4.

• 山羊痘病毒
• P32基因
• 毕赤酵母
• 诱导表达 Goatpoxvirus
• P32 gene
• pichia pastoris
• induction expression

从重组克隆载体pMD18-P32中扩增出山羊痘病毒P32基因,与毕赤酵母分泌性表达载体pPIC9K相连接,构建重组表达载体pPIC9K-P32。重组质粒pPIC9K-P32用SalⅠ线性化后,与毕赤酵母(Pichia pastoris)GS115混合后电转化,使重组表达载体与酵母染色体发生同源重组。采用G418抗性梯度筛选法得到高拷贝重组菌株,甲醇诱导目的基因表达。SDS-PAGE和Western-blotting分析结果表明,用酵母成功表达出了31 kD的重组蛋白,该蛋白具有生物学活性,能被山羊痘阳性血清识别。

• 单位
  中国农业科学院兰州兽医研究所; 农业部; 家畜疫病病原生物学国家重点实验室