长链非编码RNA XIST靶向miR-150-5p调控狼疮性肾炎系膜细胞增殖凋亡的研究

作者：肖辉; 韩星; 金洪杰; 刘潇^*

来源：河北医科大学学报, 2023, 44(07): 760-766.

• 狼疮肾炎
• 肾小球系膜细胞
• 细胞凋亡

目的 观察长链非编码RNA X-非活性特异性转录物(lncRNA XIST,XIST)、miR-150-5p对狼疮性肾炎(lupus nephritis, LN)系膜细胞增殖凋亡的影响并探究其机制。方法 分离培养LN小鼠和正常小鼠的系膜细胞。pcDNA组(转染空载体)、pcDNA-XIST组(转染pcDNA-XIST)、antagomiRNA组(转染antagomiRNA)、antagomiR-150-5p组(转染antagomiR-150-5p)、pcDNA-XIST+agomiRNA组(共转染pcDNA-XIST和agomiRNA)、pcDNA-XIST+agomiR-150-5p组(共转染pcDNA-XIST和agomiR-150-5p)用脂质体法转染至LN系膜细胞；实时荧光定量反转录聚合酶链式反应(real time fluorescence quantitativereverse transcription polymerase chain reaction, RT-qPCR)检测XIST、miR-150-5p的表达；双荧光素酶报告试验检测细胞的荧光活性；细胞计数试剂盒(cell counting kit, CCK8)、膜联蛋白V-异硫氰酸荧光素-碘化丙锭(annexin V-fluorescein isothiocyanate propidium iodide, annexin V-FITC/PI)检测细胞增殖、凋亡；蛋白免疫印迹(Western bloting, WB)实验检测细胞周期依赖性蛋白激酶抑制因子1A(cyclin-dependent kinase inhibitor 1A,P21)、增殖细胞核抗原(proliferating cell nuclear antigen, PCNA)、B淋巴细胞瘤-2基因(B-cell lymphoma-2,Bcl-2)、BCL2关联X蛋白(BCL2-associated X protein, Bax)的蛋白表达。结果 与正常小鼠肾组织或系膜细胞相比，LN小鼠肾组织或系膜细胞XIST表达显著升高，miR-150-5p表达显著降低(P<0.001);过表达XIST或抑制miR-150-5p均明显促进LN系膜细胞增殖、抑制凋亡，促进PCNA、Bcl-2蛋白表达，抑制P21、Bax蛋白表达(P<0.001)。miR-150-5p明显抑制野生型XIST细胞的荧光活性，并负向调节XIST(P<0.001)。过表达miR-150-5p明显抑制过表达XIST对LN系膜细胞增殖凋亡的影响(P<0.001)。结论 LncRNA XIST促进LN系膜细胞增殖，抑制凋亡，其机制与直接靶向miR-150-5p有关。