烟曲霉脂肪酶B在毕赤酵母中的表达及酶学性质研究

作者：唐薇; 黄伟谦; 杨博^*; 王永华; 蓝东明

来源：食品科学技术学报, 2019, 37(02): 36-41.

• 烟曲霉
• 脂肪酶
• 重组表达
• 毕赤酵母
• 酶学性质

从烟曲霉Aspergillus fumigatus GIM3.20中克隆获得了一种脂肪酶B基因(AFLB)。通过序列比对,发现AFLB与南极假丝酵母脂肪酶B(CALB)的氨基酸序列有31%的一致性,两者同属CALB家族脂肪酶;AFLB含有与家族其他成员类似的保守五肽序列(SWSQG),预测AFLB的催化三联体分别为S233、D318和H361,其中Ser233位于保守五肽序列中;此外AFLB含有一段N-端延长序列(由第1～128位氨基酸组成),是曲霉属脂肪B的特有序列。在毕赤酵母中成功地异源表达了脂肪酶AFLB,并通过亲和层析进行了纯化。SDS电泳结果显示,该酶存在部分高度N-糖基化和部分无糖基化的两种形态,对应分子量分别为45～66 kDa和42 kDa。酶学性质表征结果显示,重组脂肪酶AFLB最适反应pH值为7.0,最适反应温度为40℃,并在50℃以下具有较好稳定性,其最适底物为肉豆蔻酸对硝基苯酯。脂肪酶AFLB与CALB有高度亲缘性,具有潜在的工业应用前景。

• 单位
  华南理工大学