MDCK细胞悬浮培养驯化及其在增殖禽流感病毒H9亚型中的初步应用

作者：刘萍; 崔燕^*

来源：农业生物技术学报, 2020, 28(01): 184-190.

• 悬浮培养技术
• MDCK细胞
• 禽流感病毒
• 免疫评价

禽流感严重威胁养殖业和人类健康,并给国民经济带来巨大损失,目前接种禽流感疫苗是最有效的预防措施。用于禽流感疫苗制备的传统鸡胚工艺存在诸多问题,正逐步被细胞工艺所替代。为评价悬浮培养技术在生产细胞源禽流感病毒(Avian influenza virus, AIV)灭活疫苗的应用,本研究选取1株来源清楚的贴壁犬肾细胞(Madin-Daby canine kidney cells, MDCK),通过逐步降低血清的方法,驯化其适应悬浮条件培养。将AIV H9亚型疫苗株分别接种贴壁和悬浮MDCK细胞进行培养,将细胞源与鸡胚源病毒制备灭活疫苗,免疫无特殊病原体(specefic pathogen free, SPF)鸡(Gallus gallus),通过血清学方法评价细胞源与鸡胚源禽流感灭活疫苗的免疫效果。研究结果表明,MDCK悬浮培养48 h后的细胞密度达到3.0×106cells/mL,培养72 h后达5.0×106cells/mL,且细胞形态良好、活力高、单个悬浮于培养基中;进行摇瓶和7.5 L生物反应器培养的数据及细胞状态显示,该细胞株适合生物反应器悬浮培养。以悬浮MDCK细胞为基质增殖H9亚型禽流感病毒并制备灭活疫苗,免疫SPF鸡后21 d血清产生的红细胞凝集抑制(hemagglutination inhibion, HI)效价几何平均值达6(log2)以上,与鸡胚疫苗的免疫效果相当。上述实验结果提示,筛选获得的悬浮培养MDCK细胞株具有生长快和增殖稳定的特点;适用于增殖H9亚型禽流感病毒,且病毒血细胞凝集(hemagglutination, HA)效价高;制备的灭活疫苗抗体效价高、免疫原性好。本研究可为规模化生产禽流感及其他病毒类疫苗提供细胞学基础资料。

• 单位
  甘肃农业大学; 中农威特生物科技股份有限公司