尿酸酶在大肠杆菌高密度表达的工艺优化

作者：马鲁南; 刘忠; 张贵民^*

来源：生物技术, 2020, 30(01): 94-103.

DOI：10.16519/j.cnki.1004-311x.2020.01.0016

• 重组尿酸酶
• 诱导表达
• 发酵培养
• 蛋白表达量

[目的]利用大肠杆菌高密度表达尿酸酶进行发酵培养,预构建一种高效、低成本生产尿酸酶的工艺路线。[方法]构建重组尿酸酶大肠杆菌体系,活化种子液,设计不同的接种量、培养温度,绘制生长曲线;种子液接种至不同p H值的培养基中进行诱导表达;种子液中加入不同浓度的IPTG诱导剂。[结果]10%的接种量细胞的OD600为3. 348;菌体在37℃的培养环境下OD600达到3. 8。培养基的初始pH值在7. 5时,尿酸酶的表达量达到25%以上。种子液加入0. 8 mmol/L的IPTG后,尿酸酶的表达量超过40%,持续培养6 h后,菌体OD600为2. 9。[结论]与之前工艺对比,经过工艺优化之后,尿酸酶的表达量增超过25%,大肠杆菌的OD600达到3. 0左右。