重叠PCR克隆Exendin-4的基因及序列分析

作者：王俊红; 郭永红; 张静; 徐静; 谢璇; 杨广笑; 王全颖; 王枫

来源：中国医药导报, 2013, 10(15): 13-15.

DOI：10.3969/j.issn.1673-7210.2013.15.005

• Exendin-4
• 重叠延伸PCR
• 基因克隆 Exendin-4
• Overlap extension PCR
• Gene clone

目的克隆Exendin-4 39肽氨基酸序列基因编码区cDNA。方法根据Exendin-4氨基酸序列编码cDNA,设计正、负向引物/模板链,利用重叠延伸PCR法扩增出Exendin-4编码区基因DNA片段;将获得的基因片段插入pGEM-T-Easy质粒中;转化到大肠杆菌DH5α后挑选阳性克隆,利用限制性内切酶及核苷酸序列分析技术鉴定重组质粒。结果经质粒DNA酶切分析及序列测定,获得了Exendin-4 DNA片段序列。结论本研究成功克隆了Exendin-4 cDNA,为下一步构建Exendin-4真核表达载体打下基础,也为Exendin-4基因治疗糖尿病提供了前提条件。

• 单位
  西安华广生物工程有限公司; 第四军医大学; 西安交通大学医学院第二附属医院