肠出血性大肠杆菌O157∶H7 TccP基因克隆、表达及其抗原性鉴定

作者：杨琴; 顾江; 毛旭虎; 邹全明; 宋方洲; 丁红雷; 王庆旭

来源：中国人兽共患病学报, 2007, (04): 319-322.

DOI：10.3969/j.issn.1002-2694.2007.04.002

• 肠出血性大肠杆菌O157∶H7
• Tir-细胞骨架偶联蛋白
• 基因表达
• 多克隆抗体

目的克隆表达肠出血性大肠杆菌(EHEC)O157∶H7 Tir细胞骨架偶联蛋白(TccP)基因,并研究其抗原性。方法采用PCR法自EHEC O157∶H7 Sakai菌株基因组扩增TccP基因,构建TccP原核表达载体并在大肠杆菌中诱导表达。表达产物经初步纯化后,免疫新西兰白兔,制备兔抗TccP多克隆抗体。抗体效价及特异性用ELISA法和Western blotting法进行测定和分析。结果从EHEC O157∶H7 Sakai菌株中克隆出了1014bp的TccP基因。构建的重组质粒pET28a-TccP在大肠杆菌中获得了高效表达;以TccP免疫家兔获得了高效价多克隆抗体,Western blotting分析此抗体能与TccP发生特异性抗原抗体反应。结论在大肠杆菌中成功克隆表达了TccP基因,所获TccP具有良好的抗原性,为进一步研究TccP在EHEC O157∶H7致病机制中的作用奠定基础。

• 单位
  基础医学院; 第三军医大学; 重庆医科大学