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摘要
目的 探讨蒿甲醚脂质体(ARM-Lip)体外抑制刚地弓形虫(简称弓形虫)速殖子增殖的作用。方法 将含有1×104个人宫颈癌细胞置于96孔平底细胞培养板中培养，每孔100μl，设置不同浓度的ARM-Lip组(3.125、6.250、12.500、25.000、50.000、100.000、200.000、400.000和800.000μmol/L)，对照组(仅含1×104个人宫颈癌细胞)和空白组(仅含培养液)，24 h后ARM-Lip组每孔分别加入对应药物100μl,48 h后各孔均加入10μl CCK-8溶液，1 h后使用酶标仪检测450 nm波长处的吸光度(A值)，计算细胞存活率和ARM-Lip的半数抑制浓度(IC50)。进一步采用稳定表达绿色荧光的RH株(RH-GFP)弓形虫速殖子感染人宫颈癌细胞，与不同浓度的ARM-Lip进行共培育，筛选细胞存活率大于50%的安全浓度的ARM-Lip组，同时设置浓度为400μmol/L的磺胺嘧啶(SDZ)组和未加药组。荧光显微镜观察24、48和72 h后速殖子的增殖情况，测量共培养48 h时各组平均荧光灰度值，选取最佳浓度ARM-Lip组。吉氏染色后，光学显微镜下观察各组细胞内的纳虫空泡和弓形虫速殖子的生长情况并计数。组间比较采用单因素方差分析，两两比较采用最小显著性差异法检验。结果ARM-Lip在25μmol/L或以下浓度对人宫颈癌细胞几乎无毒性，IC50为285.1μmol/L。经100.000、200.000、400.000和800.000μmol/L的ARM-Lip处理后，平均细胞存活率分别为89.03%、76.30%、42.12%和27.85%，选取6.250、12.500、25.000、50.000和100.000μmol/L等5个浓度进行后续实验。荧光显微镜下可见未加药组弓形虫RH-GFP株速殖子大量增殖，形态正常，呈现高强度的绿色荧光；随着ARM-Lip浓度的增加，绿色荧光强度逐渐减弱。ARM-Lip体外抑制弓形虫繁殖的最佳作用浓度为100.000μmol/L，最佳作用时间为48 h。未加药组、ARM-Lip组(100.000μmol/L)和SDZ组作用48 h后，荧光灰度值分别为89.92±1.12、35.74±1.55和7.34±0.60 (F=7 916.301,P<0.01),ARM-Lip组和SDZ组的平均灰度值相比未加药组均下降(t=81.247、123.831，均P<0.01),SDZ组低于ARM-Lip组(t=-42.584,P<0.01)。经吉氏染色，未加药组、ARM-Lip组和SDZ组的纳虫空泡数分别为(28.667±2.658)、(16.667±0.817)和(12.667±1.211)个(F=135.652,P<0.01)，弓形虫RH-GFP株速殖子数分别为(176.167±13.273)、(105.333±7.789)和(70.167±5.947)个(F=192.763,P<0.01),ARM?Lip组和SDZ组纳虫空泡数量相比未加药组均减少(t=0.083、0.063，均P<0.01)，弓形虫RH?GFP株速殖子数量也减少(t=0.014、0.009，均P<0.01),SDZ组的纳虫空泡和速殖子数量均少于ARM-Lip组(t=-0.500、-0.057，均P<0.01)。结论 ARM-Lip具有较好的安全性，在体外可抑制弓形虫速殖子的增殖，但效果不及SDZ。
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