构建MS2-RIP方法用于鉴定lncRNA DANCR在肿瘤细胞中的相互作用分子

作者：巫孟师; 熊敏敏; 彭丹; 韩雪; 钟小敏^*

来源：中山大学学报(医学科学版), 2021, 42(01): 24-32.

DOI：10.13471/j.cnki.j.sun.yat-sen.univ(med.sci).2021.0004

• MS2
• RNA结合蛋白免疫沉淀
• 长链非编码RNA
• DANCR

【目的】为了探讨lncRNA DANCR在肿瘤细胞中的作用机制,本研究拟构建一种新的MS2-RIP方法用于鉴定DANCR的相互作用分子。【方法】利用MS2噬菌体衣壳蛋白可与噬菌体复制酶编码基因5’端一段由19个碱基组成的RNA茎环结构序列,即MS2结合位点(MS2 Binding Site,MS2 BS)高效结合的特点,构建串联表达MS2 BS和DANCR的过量表达质粒,通过MS2蛋白与MS2 BS的亲和作用,使DANCR得到富集,并且同步捕获与DANCR相互作用的分子,用于进一步分析鉴定。【结果】成功构建串联表达MS2 BS和DANCR的过量表达质粒用于MS2-RIP实验,该实验可显著富集DANCR以及作为阳性对照的DANCR结合蛋白EZH2。【结论】基于MS2蛋白与MS2结合位点的高效结合特性,我们针对lncRNA DANCR建立了MS2-RIP方法。该方法可有效富集DANCR以及与DANCR结合的生物活性分子,为研究DANCR的作用机制提供一种新的技术手段。

• 单位
  中山大学中山医学院