小麦黄花叶病毒Nib蛋白介导的体外转录体系的创建

作者：耿国伟; 于成明; 李向东; 原雪峰^*

来源：植物病理学报, 2019, 49(02): 212-218.

DOI：10.13926/j.cnki.apps.000370

• 小麦黄花叶病毒
• 体外转录
• Nib蛋白
• RNA依赖的RNA聚合酶

本研究是利用异源表达的小麦黄花叶病毒(Wheat yellow mosaic virus,WYMV)复制酶Nib蛋白创建了病毒核酸的体外复制系统。将WYMV的Nib编码序列扩增并插入到大肠杆菌表达载体p MAL-C2X中以构建原核表达质粒p MAL-WYNib。0.4 mmol·L-1IPTG诱导可特异性表达分子量约为100 k Da的M BP-Nib融合蛋白。根据温度梯度测定,20℃下诱导M BP-Nib的可溶性比例较高,约为30%,可满足M BP标签的亲和层析。通过与WYM V的其他蛋白和烟草丛顶病毒的RdRp进行比较,纯化的M BP-Nib融合蛋白可以特异性识别WYM V RNA1和RNA2的3’末端区域并体外合成其互补链,此体外转录体系可用于WYMV复制调控的研究。

• 单位
  山东农业大学