牛呼吸道合胞体病毒通用型实时荧光RT-PCR检测方法的建立与应用

作者：孙晓波; 姜晓霞; 王以欣; 牛超; 韩言言; 钟林翰; 乔薪瑗; 徐义刚^*; 贾烁^*

来源：中国兽医科学, 2022, 52(05): 554-563.

DOI：10.16656/j.issn.1673-4696.2022.0100

• 牛呼吸道合胞体病毒
• N基因
• 通用型real-time RT-PCR
• 样本检测

为了建立牛呼吸道合胞体病毒(BRSV)通用型实时荧光RT-PCR快速检测方法,本研究根据GenBank登录的各型BRSV N基因序列共有保守区域设计引物,首先建立了检测BRSV的常规RT-PCR方法。结果显示,该常规RT-PCR检测方法特异性良好,仅检测靶标病毒呈阳性,检测限为1.71×103 copies/μL。在此基础上,基于SYBR GreenⅠ染料建立了检测BRSV的实时荧光RT-PCR方法,该方法特异性良好,检测限为1.71×101 copies/μL,其检测灵敏度显著高于常规RT-PCR方法。利用建立的常规RT-PCR方法和实时荧光RT-PCR方法对采集的46份牛鼻拭子样本和22份牛肺脏样本进行平行检测。结果显示,常规RT-PCR方法从牛鼻拭子和肺脏样本中分别检出10份和4份呈阳性,实时荧光RT-PCR方法分别检出13份和6份呈阳性,实时荧光RT-PCR方法的阳性检测率高于常规RT-PCR方法。本研究建立的BRSV通用型实时荧光RT-PCR方法为BRSV的临床检测和流行病学调查提供技术支持。

• 单位
  东北农业大学; 浙江农林大学; 动物科技学院